产品货号：
ALH022
中文名称：
微量样品RNA提取试剂盒
英文名称：
Total RNA Extraction Kit From a small amount of sample
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品为微量RNA提取的专用试剂盒，适用于从微量的动物细胞、微切割组织和易裂解动物组织等样品提取总RNA。处理范围一般为细胞（<106）或者组织（＜5mg）。
本试剂盒采用DNA清除/RNA吸附通用柱技术配合特殊试剂配方不需DNA酶消化，有效清除gDNA残留，得到的RNA无DNA残留，可直接用于下游反转录荧光定量PCR或者高通量测序建库等试验。
- 完全不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
- 快速，简捷，单个样品操作一般可在10分钟内完成。
- 独特的DNA清除/RNA吸附通用柱技术确保有效清除gDNA残留，得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于反转录荧光定量PCR、高通量测序建库等实验。
- 多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值高达2.0～2.2，基本无DNA残留，可用于RT-PCR，Northern-blot和各种实验。
| 组分 | 规格 |
| 裂解液RLT Plus | 25mL |
| 去蛋白液RW1 | 40mL |
| 漂洗液RW | 10mL |
| 70%乙醇 | 9mL |
| RNase-free H2O | 5mL |
| Poly Carrier | 200μL |
| 微量DNA清除/RNA吸附通用柱和收集管 | 100套 |
| 微量研磨杵 | 3根 |
保存：室温，有效期1年。其中Poly Carrier可常温运输，4℃可存放一个月，长期保存置于-20℃保存。
- 不合适的储存于低温（4℃或-20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温（15～25℃）下进行。
- 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
- 所有的离心步骤均在室温完成。
- 样品处理量不要超过DNA清除/RNA吸附通用柱处理能力，否则造成DNA残留或者产量降低。如细胞处理量不超过106，组织不超过5mg。
- 本试剂盒采用微量离心柱的最佳设计，理论上最低可以提取10个以上组织细胞。
- 裂解液RLT Plus和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
- 本试剂盒采用了独特的缓冲体系和DNA清除/RNA吸附通用柱/特殊试剂配方技术，绝大多数DNA已经被清除，不需要DNase消化，可直接用于反转录荧光定量PCR。如果下游实验对痕量DNA十分敏感，可使用DNase I进一步清除DNA污染。或者在提取的时候在离心柱上直接进行DNA酶柱上消化（微量DNA柱式吸附清除试剂盒）。
- 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇!
- 如果处理的细胞量小于5000个或者处理组织量小于10μg时，匀浆前请在裂解液中加入4μL Poly Carrier。
- 培养细胞
a1.贴壁细胞：不需消化，彻底吸干净培养液体后直接加350μL裂解液RLT Plus反复吹打细胞裂解，将裂解混合物全部加到DNA清除/RNA吸附通用柱上（通用柱放在收集管内）直接接操作步骤3；不方便直接裂解的培养容器，可以用细胞刮子刮下细胞，或者胰蛋白酶消化后吹打下来收集细胞到1.5mL离心管。
a2.悬浮细胞：收集<106悬浮细胞到一个1.5mL离心管。
b.13000rpm离心10秒（或者300g离心5分钟），使细胞沉淀下来。完全吸弃上清，留下细胞团，注意不完全弃上清会稀释裂解液导致产量纯度降低。
c.轻弹离心管底部，使细胞沉淀松散，加350μL裂解液RLT Plus，用移液器反复吹打充分裂解(直到看不细胞团为止)。
d.将全部裂解混合物加到DNA清除/RNA吸附通用柱上（通用柱放在收集管内）。
e.立刻接步骤3。 - 动物组织（例如鼠肝脑）
a1.电动匀浆：<5mg组织加入350μL裂解液RLT Plus后电动彻底匀浆20～40秒。
a2.研磨杵+匀浆：1.5mL离心管内，加入100μL裂解液RLT Plus，加入<5mg组织立刻用微量研磨杵研磨匀浆完全。补足裂解液RLT Plus到350μL。
a3.液氮研磨+匀浆：在液氮中研磨组织成细粉后，取适量组织细粉(<5mg)转入装有350μL裂解液RLT Plus的1.5mL离心管中，涡旋振荡20秒，充分裂解。难裂解样品可用移液器反复吹打匀浆或者研磨杵帮助匀浆。
b.将全部匀浆混合物加到DNA清除/RNA吸附通用柱上（通用柱放在收集管内）。
c.立刻接步骤3。 - 立刻13000rpm离心1分钟，保留滤过液（RNA在滤过液中）。
- 用微量移液器较精确估计滤过液体积（通常为350μL），加入等体积的70%乙醇（请先检查是否已加入无水乙醇!），此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
- 立刻将混合物加入一个新的DNA清除/RNA吸附通用柱中（通用柱放入收集管中），13000rpm离心30秒，弃掉废液。
- 加700μL去蛋白液RW1，室温放置30秒，13，000rpm离心30秒，弃掉废液。
- 加入500μL漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），13000rpm离心30秒，弃掉废液。加入500μL漂洗液RW，重复一遍。
- 将DNA清除/RNA吸附通用柱放回空收集管中，13000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
- 取出通用柱，放入一个干净1.5mL离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加15～25μL RNase free water（事先在80～100℃水浴中加热可提高产量），室温放置1分钟，13000rpm离心1分钟得到RNA溶液。
- 减少洗脱体积可以提高RNA浓度，但是RNA产量会降低，用户根据需要选择。
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